کلونینگ ژن GRA5 توکسوپلاسما گوند‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت

نویسندگان

  • دلیمی اصل, عبدالحسین
  • شریفی, زهره
  • ناصری فر, راضی
چکیده مقاله:

مقدمه: توکسوپلاسموز یکی از بیماری‌ های زئونوز و دارای انتشار وسیع در جهان بوده که اثرات شدید بـالینی و دام پزشکی عدیده ای را ایجاد می‌کند. این انگل داخل سلولی باعث عوارض عصبی و بیماری ‌های چشمی در افراد دارای ضعف ایمنی و نوزادان متولد از مادران آلوده می شود. بروز موارد زیاد بیماری همراه با عوارض شدید و کشنده توکسوپلاسموز ضرورت یافتن واکسن مؤثری برای این بیماری را نشان می دهد. یکی از مهم ‌ترین راه‌ های کنترل بیماری واکسیناسیون است که تاکنون واکسنی مؤثر علیه این انگل پیدا نشده است. با عنایت به زئونوز بودن بیماری در جهان، یکی از مهم‌ ترین راه‌ های آلودگی انسان‌ مصرف گوشت‌ های خام یا نیم پز حاوی انگل است. بر همین اساس، استفاده از واکسن مناسب حیوانی نیز می‌تواند باعث تحریک ایمنی حیوان شده و از آن در مقابل تولید کیست در بدن محافظت نماید. با توجه به شیوع وسیع این انگل داخل سلولی در انسان و حیوانات و اثرات شدید و کشنده آن، تولید واکسن‌ های جدید بر علیه این بیماری ضرورت می‌یابد. ایمن سازی با پلاسمید حاوی ژن های کدکننده پروتئین های محافظت کننده، به عنوان روشی نسبتاً ابداعی و راهکاری امید بخش از تکنیک‌های ساخت واکسن به شمار می‌آید. به همین دلیل پلاسمید کدکننده ژن 5GRA را تهیه تا بتوان از آن برای ساخت واکسن بر علیه این عفونت استفاده نمود. مواد و روش ها: در این تحقیق، ژن GRA5 با استفاده از روش PCR در پلاسمید انتقالی pTZ57R کلون و پس از آن در باکتری اشرشیاکلی سوش TOP10 ترانسفورم شد. سپس پلاسمید نوترکیب از باکتری میزبان استخراج و ژن هدف با استفاده از آنزیم‌ های Hind3 و EcoRI از پلاسمید pTZ57Rجدا گردید. در مرحله بعد پلاسمید pcDNA3 برای پذیرش قطعه GRA5 و انجام کلونینگ نیز با آنزیم ‌های Hind3 و EcoRI برش داده شد و ژن GRA5 درون پلاسمید pcDNA3 ساب ‌کلون شد. محصول واکنش اتصال در باکتری‌ فوق ترانسفورم و در محیط LB حاوی آمپی‌سیلین کشت داده شد. پلاسمیدهای نوترکیب pcGRA5 با استفاده از کیت استخراج پلاسمید، از باکتری تخلیص و در مرحله بعد در سلول یوکاریوتی CHO ترانس فکت گردید و در خاتمه بیان پلاسمید نوترکیب مورد بررسی قرار گرفت. یافته های پژوهش: به منظور تایید مراحل مختلف کار از روش ‌های PCR و برش آنزیمی استفاده شد. پس از الکتروفورز مشخص شد که قطعه GRA5 در پلاسمید pcDNA3 کلون ‌شده است. قطعه مورد نظر بر روی ژل الکتروفورز در حدود 363 bp بود که هم‌اندازه ژن GRA5 توکسوپلاسما گوند‌ای است. به منظور تأیید نهایی، قطعه مورد نظر از تعیین توالی استفاده و با قطعه استاندارد ثبت شده در بانک ژن مقایسه گردید. برای تایید بیان ژن مورد نظر در سلول CHO از روش وسترن بلات استفاده شد. بحث و نتیجه‌گیری: نتایج نشان داد که کلونینگ و ترانسفورم قطعه GRA5 در پلاسمید pcDNA3 با موفقیت انجام شده و با استفاده از روش وسترن بلات بیان پروتئین 13 کیلو دالتونی تایید گردید.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

کلونینگ و شناسایی ژنGRA4 توکسوپلاسما گونده‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcDNA3

  Background and Objective: Toxoplasmosis, caused by an intracellular protozoan parasite, Toxoplasma gondii, is widespread throughout the world. Being a cause of congenital disease and abortion in humans and in domestic animals, the disease is of major medical and veterinary importance. In addition, it has increased importance due to toxoplasma encephalitis in AIDS patients. Therefore, developi...

متن کامل

کلونینگ ژن gra۵ توکسوپلاسما گوند ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت

مقدمه: توکسوپلاسموز یکی از بیماری های زئونوز و دارای انتشار وسیع در جهان بوده که اثرات شدید بـالینی و دام پزشکی عدیده ای را ایجاد می کند. این انگل داخل سلولی باعث عوارض عصبی و بیماری های چشمی در افراد دارای ضعف ایمنی و نوزادان متولد از مادران آلوده می شود. بروز موارد زیاد بیماری همراه با عوارض شدید و کشنده توکسوپلاسموز ضرورت یافتن واکسن مؤثری برای این بیماری را نشان می دهد. یکی از مهم ترین راه ...

متن کامل

کلونینگ و شناسایی ژنgra۴ توکسوپلاسما گونده ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcdna۳

مقدمه و هدف: توکسوپلاسموزیس به وسیله یک انگل تک یاخته داخل سلولی (توکسوپلاسما گونده ای) ایجاد می شود و در سراسر جهان گسترش دارد. این بیماری دارای اهمیت عمده پزشکی و دامپزشکی است و عامل بیماری مادرزادی در انسان و حیوانات اهلی است. علاوه بر این، به تازگی به دلیل آنسفالیت در افراد ایدزی به اهمیت آن افزوده شده است. به همین دلیل تهیه یک واکسن مؤثر علیه توکسوپلاسما یک هدف مهم در جهان است. آنتی ژن گرا...

متن کامل

شناسایی و بیان ژنGRA7 توکسوپلاسما گونده‌ای سویه RH در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcDNA3

سابقه و هدف: توکسوپلاسموزیس از بیماری‌های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی‌ژن ‌گرانولی 7 (GRA7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شو...

متن کامل

کلونینگ و توالی‌یابی پلاسمید کد کننده پروتئین گرانولی متراکم 14 سویه RH توکسوپلاسما گوندیی

Background and purpose: Toxoplasmosis is a common parasitic disease throughout the world and ‎one-third of the population has antibodies to Toxoplasma gondii. This disease causes serious medical ‎problems in fetuses and immunocompromised individuals. As gene encoding protein GRA14 can be ‎considered as a suitable target for DNA vaccine and designing diagnostic kits the aim of this study was to ...

متن کامل

شناسایی و بیان ژنgra۷ توکسوپلاسما گونده ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcdna۳

سابقه و هدف: توکسوپلاسموزیس از بیماری های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی ژن گرانولی 7 (gra7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شود...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 19  شماره 3

صفحات  1- 12

تاریخ انتشار 2011-10

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

کلمات کلیدی

کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023